化学发光蛋白芯片用于检测肝癌患者血清CA19-9水平的方法研究

目的:探讨一种简单、有效、低成本、低耗时的化学发光蛋白芯片方法用于检测血清中的糖链抗原19-9(Carbohydrate Antigen19-9,CA19-9),以有助于对原发性肝癌的早期辅助诊断。方法:预先在醛基芯片上包被鼠源CA19-9单克隆抗体,建立CA19-9抗体蛋白芯片,共筛选出46份肝癌血清和32份正常健康人血清,然后用蛋白芯片方法进行检测,并以化学发光成像对检测结果进行判定。结果:24份肝癌血清的CA19-9水平高于37 U/m L,22份肝癌血清的CA19-9水平低于37 U/m L;30份正常人血清CA19-9含量低于37 U/m L,2份正常人血清的CA19-9含量为37 U/m L;灵敏度为52.17%,特异性为93.75%,ROC曲线下面积0.688[95%CI:0.566,0.811]。结论:本研究成功的建立了血清CA19-9的化学发光蛋白芯片检测方法。     

呼吸道感染患儿EBV-DNA载量表达及其与肝肾功能损伤的关系研究

摘要 目的：探讨呼吸道感染患儿爱泼斯坦-巴尔病毒（EBV）-脱氧核糖核酸（DNA）载量表达及其与肝肾功能损伤的关系研究。方法：选取2016年1月至2019年6月本院门诊及病房住院治疗经临床确诊的175例呼吸道感染儿童为研究对象,依据EBV-DNA载量水平分为阳性组（n=117）和阴性组（n=58）,比较不同性别、年龄的呼吸道感染患儿EBV-DNA阳性率,根据EBV-DNA载量峰值将阳性组患儿分为EBV-DNA高载量组(n=21)、中载量组（n=35）和低载量组（n=61）,比较不同EBV-DNA载量组患儿肝肾功能异常比例及血清丙氨酸转氨酶（ALT）、天冬氨酸氨基转移酶（AST）、胱抑素 C(CysC)、β₂微球蛋白(β₂-MG)水平,Pearson相关性分析EBV-DNA载量与ALT、AST、CysC、β₂-MG的关系。结果：不同性别患儿间EBV -DNA阳性率差异无统计学意义（P>0.05）,1-3、3-6岁年龄段儿童中EBV -DNA阳性率最高,不同年龄间患儿EBV -DNA阳性率差异有统计学意义（P<0.05）;EBV-DNA低载量组、中载量组、高载量组的肝异常比例为19.67%、48.57%、66.67%,肾异常比例为13.11%、42.86%、52.38%,不同EBV -DNA载量患儿肝肾功能异常比例相比,差异有统计学意义（P<0.05）;血清ALT、AST、CysC、β₂-MG水平随EBV-DNA载量升高而升高（P<0.05）, EBV -DNA载量与ALT、AST、CysC、β₂-MG水平呈正相关性（P＜0.05）。结论：呼吸道感染患儿EBV -DNA载量升高会增加发生肝肾功能损伤的风险,且在1-6岁儿童EBV -DNA阳性率较高,检测EBV -DNA载量有助于呼吸道感染患儿肝肾功能的损伤的评估。     

柯萨奇病毒A组16型衣壳蛋白VP1的原核表达及初步活性测定

目的:原核表达柯萨奇病毒A组16型(CVA16)衣壳蛋白VP1,以便于研制血清学检测试剂。方法:在基因库中钓取CVA16-VP1的全长序列,采用PCR逐步合成法合成其全长基因,测序正确后克隆到表达载体pET28a(+)中,构建重组表达质粒pET28a(+)/VP1,转化大肠杆菌BL21,IPTG诱导表达,利用Ni2+亲和层析柱对重组蛋白进行纯化;建立捕获免疫酶联法检测IgM抗体,检测20份手足口病阳性血清和30份阴性血清,评价重组抗原的灵敏度和特异性;采用CVA16全病毒免疫的抗小鼠血清进行Western印迹。结果:重组CVA16-VP1蛋白在大肠杆菌中获得高效表达;用重组蛋白抗原检测,20份手足口病患儿阳性血清中有4份阳性,其中1份同时为肠道病毒71型(EV71)VP1阳性,30份阴性血清无反应。结论:实现了CVA16-VP1的高效表达,初步结果显示重组蛋白具有较好的抗原性,为柯萨奇病毒A组16型诊断试剂的研究奠定了基础。     

基于硫醇自组装的肌红蛋白单克隆抗体金膜固相载体的构建

为了在金膜固相载体上固定肌红蛋白单克隆抗体 (MbAb),通过在金膜上生长一层巯基酸和巯基醇的混合自组装分子膜 (SAMs),用原子力显微镜 (AFM) 和X射线光电子能谱仪 (XPS) 分析样品的性质,再以1-(3-二甲基氨基丙基) 3-乙基碳化二亚胺盐酸 (EDC·HCl) 作为催化剂,自组装膜和抗体的氨基发生偶联反应,将抗体固定在金膜表面,并进行肌红蛋白抗原 (MbAg) 的测定。结果显示,通过条件优化实验,发现50 mmol/L的巯基16酸和巯基11醇混合乙醇溶液,60 ℃处理金膜3 h后,再偶联